一、產(chǎn)品簡介

BrainBits小鼠小腦培養(yǎng)試劑盒，產(chǎn)品組分：1 個(gè)E18小鼠小腦、12mL NbAstro、6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca 、1個(gè)帶橡膠球的火拋光移液、1對PDL涂層蓋板。

二、產(chǎn)品使用

（一）制劑（無菌罩室溫）

1. 將6mg無菌木瓜蛋白酶（PAP 6mg）溶解于3ml THRYVE Embryonic-CaCl中，制備細(xì)胞解離液，最終工作濃度為2毫克/毫升木瓜蛋白酶。在30℃下孵育10分鐘使其溶解。放入冰箱或冰中備用。組織和木瓜蛋白酶必須處于相同的溫度（根據(jù)處理組織的數(shù)量，可能需要幾個(gè)單位）。

2. 將80µl臺普蘭藍(lán)（Sigma T8154）加入0.5ml試管中進(jìn)行第9步。

（二）細(xì)胞分散（無菌罩室溫）：

1. 用2ml移液管，用最少的培養(yǎng)基小心地將組織轉(zhuǎn)移到木瓜蛋白酶上。將THRYVE胚胎wanquan移植到一個(gè)新的無菌15ml試管中

保存到步驟3。

2. 組織與木瓜蛋白酶在30℃下孵育10分鐘。輕輕地旋轉(zhuǎn)每2分鐘或使用加熱搖振板在30℃和150rpm。

3. 用2ml移液管從木瓜蛋白酶中除去帶有少量培養(yǎng)基的組織，并從步驟1中返回THRYVE胚胎wanquan培養(yǎng)基。

4. 使用硅化巴斯德移液器，將組織分散不超過10倍或90%，避免產(chǎn)生氣泡?？蛇x：加入400µl 1mg/ml DNase I溶液（StemCell Technologies 07469）加入細(xì)胞漿液中，在室溫下孵育15分鐘，輕彈或旋轉(zhuǎn)。

5. 讓未分散的碎片靜置1分鐘。

6. 將含有分散細(xì)胞的上清液轉(zhuǎn)移到15ml無菌管中。留下約50μl含有碎片的THRYVE胚胎wanquan體?？蛇x用70µm濾池過濾細(xì)胞液。

7. 旋轉(zhuǎn)1100rpm (200 x G) 1分鐘。丟棄上清，留下含有微球的約50μl THRYVE胚胎wanquan液。

8. 分散細(xì)胞顆粒（用手指或管輕彈管底部），重懸于1ml NbActiv1™中。

9. 取20μl細(xì)胞液加入含有80μl臺盼藍(lán)（1:5稀釋）的0.5ml試管中，或按實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)行計(jì)數(shù)程序計(jì)數(shù)。

10. 使用血細(xì)胞計(jì)（計(jì)算細(xì)胞/ml）或使用當(dāng)前的實(shí)驗(yàn)室程序計(jì)數(shù)細(xì)胞。

（三）細(xì)胞電鍍（無菌罩室溫）：

1. 用NbActiv1™稀釋0.2ml/cm2的細(xì)胞，并以16,000個(gè)細(xì)胞/cm2或所需濃度進(jìn)行板載。

2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%濕度（或環(huán)境O2）孵育。

3. 4天后，神經(jīng)元顯示軸突和樹突；突觸和動作電位開始于7天。

4. 每3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養(yǎng)基。

（四）可行性分析:

1. 用37℃HBSS （0.2ml/cm2底物）沖洗兩次。

2. 用15mg/ml雙醋酸熒光素丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶水原液配制染料混合物，各稀釋15µl，加入1.5ml HBSS（1:100稀釋）。

3. 在步驟1中加入的0.2ml HBSS中加入20µl染料混合物（1:10稀釋）。

4. 約1分鐘后，使用適合熒光素?zé)晒獾乃{(lán)色激勵(lì)（綠色細(xì)胞）計(jì)數(shù)活細(xì)胞。用綠色激勵(lì)計(jì)數(shù)死細(xì)胞碘化丙啶熒光（小紅核）。

5. 生存能力=（綠色細(xì)胞/單位面積）/（總細(xì)胞數(shù)/單位面積）或生存=綠色細(xì)胞/（綠色+紅色細(xì)胞）。

三、產(chǎn)品目錄表

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