細胞凋亡是指細胞在一定的生理或病理條件下，遵循自身的程序，自己結(jié)束生命，最后裂解為若干凋亡小體，被其他細胞吞噬的過程，也稱為程序性細胞死亡。細胞凋亡是多細胞有機體為調(diào)控機體發(fā)育、維護內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的方式，凋亡過程是由基因控制的細胞主動死亡過程。那么你知道常見的細胞凋亡檢測方法有什么嗎？讓我們一起來看看吧！
 

　　一、基于生物學(xué)功能的方法：
 

　　1.Annexin V/PI檢測磷脂酰絲氨酸 (PS)
 

　　在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)位于細胞膜內(nèi)側(cè)；細胞凋亡早期，PS會從細胞膜胞質(zhì)外翻到細胞膜外側(cè)。Annexin V (膜聯(lián)蛋白V)是一種Ca2+ 依賴性磷脂結(jié)合蛋白，可與外翻的PS特異性結(jié)合，因此Annexin V 常作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI) 染色液是一種不能穿透細胞膜的紅色核酸染料，可對凋亡晚期細胞及壞死細胞染色。
 

　　Annexin V 經(jīng)熒光素標記后作為熒光探針，如Annexin V-FITC ，與PI聯(lián)合(凱基貨號：KGA107)染色后，正常細胞基本無熒光(Annexin V-/PI-)，早期凋亡細胞呈綠色熒光(Annexin V+/PI-)，晚期凋亡細胞及壞死細胞則呈綠色和紅色熒光(Annexin V+/PI+)。借助流式細胞術(shù)即可檢測細胞的凋亡情況。此外，除了用FITC標記Annexin V 之外，也可以用EGFP、PE、APC、mCherry等作為熒光探針，也可以用7-AAD來替代PI作為核酸染料。
 

　　2.JC-1檢測線粒體膜電位凋亡早期細胞，線粒體膜通透性增加，線粒體膜電位(ΔΨm)下降甚至消失。線粒體膜電位的下降被認為是細胞凋亡過程中最早發(fā)生的生物學(xué)變化。一旦線粒體膜電位被破壞，細胞凋亡將不可逆轉(zhuǎn)。
 

　　二、基于生化標記的方法：
 

　　1.TUNEL法檢測DNA片段原位
 

　　細胞凋亡形成的DNA斷裂會暴露DNA鏈的3’-OH末端，末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)可催化斷裂DNA的3′-OH端的核酸聚合反應(yīng)，加入帶有熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素標記的dUTP，顯色反應(yīng)后可特異地進行原位凋亡細胞的檢測。正常或增殖細胞幾乎沒有DNA的斷裂，故很少被染色。TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(凱基貨號：KGA7072)適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細胞樣本(細胞涂片或爬片)的凋亡原位檢測。對于經(jīng)過固定和洗滌的細胞或組織，只要經(jīng)過一步染色反應(yīng)，洗滌后就可以通過熒光顯微鏡或激光共聚焦等成像設(shè)備檢測到凋亡細胞。
 

　　2.彗星電泳檢測DNA片段化
 

　　彗星電泳實驗的原理：當各種內(nèi)源性和外源性因素誘發(fā)細胞DNA鏈斷裂時，其超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞，在細胞裂解液作用下，細胞膜、核膜等膜結(jié)構(gòu)受到破壞，細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA以及其他成分均擴散到電解液中，而核DNA由于分子量太大不能進入凝膠而留在原位。詳細操作和數(shù)據(jù)分析可參考干貨|彗星電泳法檢測DNA損傷-從實驗到數(shù)據(jù)分析。
 

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